工作原理

蛋白質定量是蛋白質研究的基礎工作之一。BCA (bicinchoninic acid)是理想的蛋白質定量方法，是當前比Lowry法更專用于檢測總蛋白質含量的產品。

BCA Protein Assay Kit?是一種用于蛋白質濃度測定的試劑盒，它基于BCA（Bicinchoninic Acid）法進行蛋白質定量分析。蛋白質在堿性條件下，將 Cu ²⁺還原為 Cu ⁺，Cu ⁺與 BCA 試劑形成紫顏色的絡合物，該復合物的顏色深淺與蛋白質濃度成正比，從而可以通過測量其在562nm處的吸光度來確定蛋白質的濃度。該方法快速靈敏、穩(wěn)定可靠，不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，對不同種類蛋白質檢測的變異系數非常小。BCA 蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)實現了蛋白濃度測定簡單、穩(wěn)定性高、靈敏度高和兼容性高的特點。

產品介紹

C05-02001

產品優(yōu)勢

準確靈敏，線性范圍廣：BCA 試劑的蛋白質測定范圍是 10-2000μg/mL。

快速：45 分鐘內完成測定，比經典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。

經濟實用：在微孔板中進行測定，可大大節(jié)約樣品和試劑用量。

效果穩(wěn)定：不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響，檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍。

使用說明
1. 配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按體積比A : B (50：1)配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫24小時內穩(wěn)定。
2. 稀釋標準品：取10微升標準品用PBS稀釋至100ul（標準品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20ul加到96孔板的蛋白標準品孔中，加PBS補足到20ul。
3. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中，補加PBS到20ul。
4. 各孔加入200ul BCA工作液，37℃放置30分鐘。
5. 冷卻到室溫，用酶標儀562nm測定OD值，根據標準曲線計算出蛋白濃度。

注意事項
1. 在低溫條件或長期保存出現沉淀時，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發(fā)現細菌污染則應丟棄。
2. 樣品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類會影響檢測結果，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒；高濃度的去垢劑也影響實驗結果，可用TCA沉淀去除干擾物質。
3. 要得到更為精確的蛋白濃度結果，每個蛋白梯度和樣品均需做復孔, 每次均應做標準曲線。
4. 當試劑A和B混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失，工作液在密閉情況下可保存1周。
5. 需準備37℃水浴或溫箱、酶標儀或普通分光光度計，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳。酶標儀需與96孔酶標板配套使用。使用分光光度計測定蛋白濃度時，試劑盒測定的樣品數量會因此而減少。使用溫箱孵育時，應注意防止因水粉蒸發(fā)影響檢測結果。

文獻引用精選